產(chǎn)品概述：
本試劑盒用于從各種植物葉片、多糖塊莖/根部/種子、水果果肉以及真菌中提取總RNA。提取的總RNA分子完整、純度高，適用于Northern Blot 、RT-PCR、體外翻譯、Primer Extension 、S1核酸酶作圖、RNase 保護(hù)測定、構(gòu)建 cDNA 文庫等各種分子生物學(xué)實驗。
一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性
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Cat.No. |
UE-MN-PP -RNA-10 |
UE-MN-PP -RNA-50 |
UE-MN-PP -RNA-250 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
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Spin Columns NP |
10 |
50 |
250 |
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gDNA removal Columns |
10 |
50 |
250 |
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Collection Tubes（2mL） |
20 |
100 |
500 |
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Buffer RL-1 |
8 ml |
40 ml |
200 ml |
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Buffer PL-1 |
8 ml |
40 ml |
200 ml |
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Buffer RW1 |
8 ml |
40 ml |
200 ml |
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Buffer RW2 |
3 ml |
12 ml |
60 ml |
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RNase-Free ddH2O |
2 ml |
10 ml |
30 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
Buffer RL-1：細(xì)胞裂解液RL。室溫密閉貯存。低溫下可能會有沉淀析出，需在60℃水浴讓沉淀完全溶解并冷卻至室溫后使用。
Buffer PL-1：細(xì)胞裂解液PL。室溫密閉貯存。低溫下可能會有沉淀析出，需在60℃水浴讓沉淀完全溶解并冷卻至室溫后使用。
Buffer RW1：洗滌液。室溫密閉貯存。
Buffer RW2：去鹽液，為濃縮液，使用前須按試劑瓶子標(biāo)簽所示，加入無水乙醇進(jìn)行稀釋。
中和液。室溫密閉貯存。
RNase-Free ddH2O：RNA洗脫液。室溫密閉貯存。
二、注意事項
1. RNA提取完成后建議置于冰上待用，若不能立刻進(jìn)行后續(xù)實驗，請保存于-80℃。
2. RNA分管盡快使用，電泳檢測用無酶水進(jìn)行沖洗，電泳緩沖液用RNA無酶水配置，提高電壓并縮短跑膠時間。
3. 選新鮮組織樣本，避免反復(fù)凍融，組織離體后須迅速放入液氮中速存，后期轉(zhuǎn)移至-80℃長期保存。
4. 所有試劑用DEPC處理過的溶劑配制。請選用RNase-free槍頭和離心管，以避免提取過程中RNA被RNase降解。
三 、實驗準(zhǔn)備
1. 自備試劑：無水乙醇（AR）、β-巰基乙醇或DTT
2. Buffer RW2在使用前需按照試劑瓶標(biāo)簽所示加入無水乙醇進(jìn)行稀釋后使用；
3. (可選)提升裂解液的變性能力：使用前分裝適量Buffer RL-1或Buffer PL-1按每mL Buffer RL-1 或Buffer PL-1加入10μL β-巰基乙醇或20μL的2M DTT，混合液室溫可保存1月。β-巰基乙醇/DTT 能打斷 RNase分子間的二硫鍵，高效滅活 RNase，提高RNA質(zhì)量。由于β-巰基乙醇/DTT 的毒性，多數(shù)情況下，不添加也可以得到完整的RNA。
4. 試劑盒提供多種裂解緩沖液：Buffer RL-1和Buffer PL-1，具體選擇參考表1 。
5. 若不確定植物種類，推薦優(yōu)先嘗試Buffer PL-1。
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樣本種類 |
推薦樣本量 /mg |
樣本示例 |
推薦裂解液 |
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Buffer RL-1 |
Buffer PL-1 |
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簡單植物組織 （葉片、根、莖） |
50-100 |
小麥、水稻、玉米、菠菜、娃娃菜、豌豆苗、根莖 |
√ |
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多糖多酚植物葉片 |
桃葉、梅葉、梨葉、葡萄葉、月季花瓣 |
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√ |
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淀粉含量高的植物組織 |
20-50 |
玉米種子、紅豆種子、土豆 |
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√ |
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油性高的植物組織 |
油菜籽 |
√ |
√ |
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水果果肉 |
100-500 |
西瓜、蘋果 |
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真菌 |
20-100 |
香菇、金針菇 |
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表1 不同種類樣本推薦的樣本處理量及裂解液
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