產(chǎn)品介紹

AugeGreen是一種用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）的DNA結(jié)合染料。該染料的諸多優(yōu)點(diǎn)使它遠(yuǎn)勝于SYBR Green I。除了有相似的光譜特性，AugeGreen有三個(gè)主要特點(diǎn)使它區(qū)別于SYBR Green I。

首先，AugeGreen對(duì)PCR的抑制性遠(yuǎn)小于SYBR Green I。因此，使用AugeGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。同時(shí)，AugeGreen在實(shí)驗(yàn)中可以使用較高的濃度，從而獲得遠(yuǎn)強(qiáng)于SYBR Green I擴(kuò)增信號(hào)。較高濃度的AugeGreen也消除了“染料重分布”的缺陷，使AugeGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線(xiàn)分析（HRM）。該分析正被越來(lái)越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對(duì)PCR的抑制性，從而要求其使用濃度必須很低，因此SYBR Green I無(wú)法解決由低濃度造成的染料重分布問(wèn)題，既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同時(shí)，染料重分布問(wèn)題也可能影響常規(guī)熔解曲線(xiàn)的可靠性，因?yàn)榈腿埸c(diǎn)的DNA鏈可能由于這種原因而無(wú)法檢測(cè)到。

第二，AugeGreen的穩(wěn)定性極強(qiáng)。在正常的儲(chǔ)存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì)被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲(chǔ)存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。與之相反，SYBR Green I不穩(wěn)定而且降解后對(duì)PCR抑制性更強(qiáng)。

第三，AugeGree降低了細(xì)胞膜透性，因而比SYBR Green I更加安全。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的測(cè)試結(jié)果顯示，AugeGreen既沒(méi)有誘變性也沒(méi)有細(xì)胞毒性。相反，雖然SYBR Green I本身誘變性很弱，但它在細(xì)胞中可能抑制了正常DNA的修復(fù)機(jī)制，使其有誘變?cè)鰪?qiáng)作用?？紤]到PCR的廣泛使用，其安全性應(yīng)該足夠重視。

產(chǎn)品規(guī)格

1mL

儲(chǔ)存條件

-20℃避光保存，有效期見(jiàn)外包裝

應(yīng)用范圍

實(shí)時(shí)定量PCR、高分辨率溶解曲線(xiàn)

產(chǎn)品參數(shù)

λabs/λem = 500/530 nm (結(jié)合DNA)

λabs = 471 nm (未結(jié)合DNA)

AugeGreen染料特性

1. 光譜特性

圖1. 在TE緩沖液中，結(jié)合到雙鏈DNA中AugeGreen染料的

激發(fā)光譜（藍(lán)色）和發(fā)射光譜（紅色）

2. SYBR Green I與AugeGreen熒光染料的穩(wěn)定性比較

圖2. AugeGreen、SYBR Green I的吸收光譜1.2 μM, pH9的Tris緩沖液中，99℃孵育3 h后，兩種熒光染料溶液的相對(duì)熒光強(qiáng)度，ROX作參照物

3. 染料的穩(wěn)定性

Ames實(shí)驗(yàn)顯示，AugeGreen染料沒(méi)有細(xì)胞毒性和致突變性，該染料不具細(xì)胞膜滲透性（圖3），這是其低細(xì)胞毒性的一個(gè)關(guān)鍵因素。相反地，眾所周知，SYBR Green I熒光染料具有很強(qiáng)的致突變性，可能原因是其抑制了細(xì)胞內(nèi)DNA修復(fù)機(jī)制（Ohta, etel. Mutat. Res.492, 91(2001)），而SYBR Green I較強(qiáng)的細(xì)胞毒性是由其較高的細(xì)胞膜滲透性所導(dǎo)致的（圖3）。

圖3. 37℃條件下，用SYBR Green I或AugeGreen（1.2 μM）孵育HeLa細(xì)胞，分別在5 min或30 min后拍照，觀(guān)察熒光強(qiáng)度。SYBR Green I 迅速滲透進(jìn)入細(xì)胞，然而AugeGreen幾乎不具有細(xì)胞膜滲透性。