產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號和規(guī)格：
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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M7405S |
鏈霉親和素磁珠（300 nm） |
1 mL, 10 mg/mL, 300 nm |
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M7405M |
10 mL, 10 mg/mL, 300 nm |
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M7406S |
鏈霉親和素磁珠（2.8 μm） |
1 mL, 10 mg/mL, 2.8 μm |
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M7406M |
10 mL, 10 mg/mL, 2.8 μm |
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M7407S |
鏈霉親和素磁珠（5 μm） |
1 mL, 10 mg/mL, 5 μm |
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M7407M |
10 mL, 10 mg/mL, 5 μm |
儲存條件：2-8℃保存，有效期見外包裝
產(chǎn)品介紹
鏈霉親和素-生物素（SA-Biotin）系統(tǒng)具有極高的結(jié)合親和力（Kd=10^-15），在生物領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。Streptavidin 采用蛋白偶聯(lián)技術(shù)將SA共價連接于固相載體表面，可高效結(jié)合生物素化抗體、核酸、蛋白等配體分子。本產(chǎn)品采用超順磁性微球，粒徑均一、形貌規(guī)整，有利于方便、快捷地捕獲目標(biāo)分子以及實現(xiàn)磁性分離。本產(chǎn)品可配套自動化設(shè)備進(jìn)行高通量操作。表1為磁珠產(chǎn)品信息。
表1. 鏈霉親和素磁珠產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品信息 |
M7405 |
M7406 |
M7407 |
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粒徑 |
300 nm |
2.8 μm |
5 μm |
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生物素化單鏈寡核苷酸 (24nt)（pmol/mg磁珠） |
≥ 450 |
≥ 300 |
≥ 300 |
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生物素化IgG（μg/mg磁珠） |
≥ 15 |
≥ 10 |
≥ 10 |
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磁珠濃度 |
10 mg/mL |
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磁珠表面 |
親水基團(tuán) |
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保存溶液 |
1×PBS，含0.1%（W/V）BSA，0.1%（V/V）proclin-300 |
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保存條件 |
2-8℃ |
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適用范圍
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圖例 |
應(yīng)用方向 |
簡述 |
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免疫檢測、分離蛋白、 細(xì)胞分選等 |
Streptavidin可特異性地結(jié)合生物素化抗體或抗原，作為免疫檢測、ELISA等固相反應(yīng)載體，或用于分選細(xì)胞等 |
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分離核酸、制備核酸探針等 |
Streptavidin可特異性地結(jié)合生物素化的核酸探針，廣泛應(yīng)用于DNA、RNA的雜交實驗 |
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DNA-蛋白質(zhì)相互作用研究 |
Streptavidin可特異性地結(jié)合生物素化的靶點DNA或RNA片段，可用于蛋白質(zhì)與核酸相互作用研究 |
實驗步驟
使用前準(zhǔn)備
1.緩沖液：以下為常用的緩沖液成分，用戶可根據(jù)需要調(diào)整緩沖液的鹽濃度及pH。
2. Buffer I（適用于結(jié)合生物素化核酸）：10 mM Tris-HCl（pH 7.5），1 mM EDTA，1 M NaCl，0.01%-0.1% Tween-20。
3. Buffer II（適用于結(jié)合生物素化抗體/蛋白）：PBS，pH 7.4，含0.05% Tween-20，可根據(jù)需要添加0.01%-0.1% BSA。
4.化學(xué)發(fā)光Washing buffer：用戶根據(jù)需求配制洗液，使用時平衡至室溫。
5.磁性分離器。
6.漩渦振蕩器。
7.旋轉(zhuǎn)混合儀。
8.移液器及吸頭。
9.合適的離心管。
結(jié)合生物素化核酸
1.將磁珠瓶置于漩渦振蕩器上20 s，振蕩重懸磁珠。用移液器移取100 μL磁珠到新的離心管中。將離心管置于磁性分離器上，靜置1 min（此操作后續(xù)簡稱為磁性分離），用移液器吸去上清液，從磁性分離器上取下離心管。
備注：用戶可根據(jù)生物素化分子的多少，參考產(chǎn)品信息表中磁珠的載量，計算需要取用的磁珠量。建議生物素化分子的加入量為磁珠載量的1-2倍，使磁珠飽和。
2.加入1 mL Buffer I到離心管中，蓋上離心管蓋，充分振蕩重懸磁珠。磁性分離，移去上清液。
備注：當(dāng)步驟1取用磁珠體積大于1 mL時，加入與磁珠體積相同的Buffer I。
3.重復(fù)步驟2一次。
4. 加入500 μL的用Buffer I稀釋的生物素化核酸（使磁珠濃度為2 mg/mL），充分振蕩重懸磁珠。將離心管置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)混合30 min。
5.磁性分離，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管。
6.按步驟2的方法洗滌磁珠三次。
7.根據(jù)后續(xù)實驗的要求，加入合適的低鹽緩沖液，重懸磁珠。至此結(jié)合生物素化核酸步驟完成。磁珠可用于后續(xù)操作。
8.用戶可以通過測定反應(yīng)前后核酸的濃度，計算結(jié)合到磁珠上的核酸量=（反應(yīng)前濃度-反應(yīng)后濃度）×反應(yīng)溶液體積。
結(jié)合生物素化抗體/蛋白操作流程
1.將磁珠瓶置于漩渦振蕩器上20 s，振蕩重懸磁珠。用移液器移取100 μL磁珠到新的離心管中。磁性分離，用移液器吸去上清液，從磁性分離器上取下離心管。
備注：用戶可根據(jù)生物素化分子的多少，參考產(chǎn)品信息表中磁珠的載量，計算需要取用的磁珠量。建議生物素化分子的加入量為磁珠載量的1-2倍，使磁珠飽和。
2.加入1 mL Buffer II到離心管中，蓋上離心管蓋，充分振蕩重懸磁珠。磁性分離，移去上清液。
備注：當(dāng)步驟1取用磁珠體積大于1 mL時，加入與磁珠體積相同的Buffer II。
3.重復(fù)步驟2兩次，共洗滌三次。
4.加入1 mL用Buffer II稀釋的生物素化抗體/蛋白（使磁珠濃度為1 mg/mL），充分振蕩重懸磁珠。將離心管置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)混合60 min。
5.磁性分離，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管。
6.按步驟2的方法洗滌磁珠五次。
根據(jù)后續(xù)實驗的要求，加入Buffer II或其他合適的緩沖液，重懸磁珠。至此結(jié)合生物素化抗體/蛋白步驟完成。磁珠可用于后續(xù)操作。
磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫診斷操作流程
1.調(diào)整磁珠至合適濃度（建議0.2-0.8 mg/mL），將磁珠置于漩渦振蕩器上20 s，振蕩重懸磁珠。用移液器移取50 μL磁珠至96孔板中，磁性分離，用移液器吸去上清液，從磁性分離器上取下96孔板。
2.每孔加入100 μL生物素化捕獲抗體，充分震蕩重懸磁珠，37℃恒溫箱中孵育15 min后，磁性分離，用移液器吸去上清液，從磁性分離器上取下96孔板。
3.每孔加入200 μL的Washing buffer，充分震蕩重懸磁珠，磁性分離，用移液器吸去上清液，從磁性分離器上取下96孔板，該步驟再重復(fù)2次，共洗滌3次。
4.每孔加入50 μL待測物標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本，充分震蕩重懸磁珠，37℃恒溫箱中孵育15 min后，磁性 分離，用移液器吸去上清液，從磁性分離器上取下96孔板。
5.每孔加入200 μL的Washing buffer，充分震蕩重懸磁珠，磁性分離，用移液器吸去上清液，從磁性 分離器上取下96孔板，該步驟再重復(fù)2次，共洗滌3次。
6.每孔加入100 μL酶標(biāo)記抗體，充分震蕩重懸磁珠，37℃恒溫箱中孵育15 min后，磁性分離，用移液 器吸去上清液，從磁性分離器上取下96孔板。
7.每孔加入200 μL的Washing buffer，充分震蕩重懸磁珠，磁性分離，用移液器吸去上清液，從磁性 分離器上取下96孔板，該步驟再重復(fù)2次，共洗滌3次。
8.每孔加入150 μL的底物液，充分震蕩重懸磁珠，避光孵育5 min。
9.將96孔板放入化學(xué)發(fā)光儀讀數(shù)，并進(jìn)行相應(yīng)數(shù)據(jù)處理
注意事項
1.應(yīng)避免對磁珠進(jìn)行冷凍等操作。
2.為減少磁珠損失，每次磁性分離的時間應(yīng)不少于1 min。
3.從磁珠保存管中移取磁珠前應(yīng)充分震蕩重懸均勻。操作過程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
4.建議使用質(zhì)量好的移液器吸頭和反應(yīng)管，避免因粘附磁珠及溶液而造成損失。
5.生物素化分子的大小會影響磁珠的載量。用戶需要根據(jù)實驗確定磁珠對特定生物素化分子的載量。
6.生物素化分子的加入量應(yīng)為磁珠載量的1-2倍，以使磁珠飽和。
7.如需生物素與SA磁珠分離，可采用：
方法一：0.1% SDS，煮沸5 min；
方法二：pH=8.2，含95%甲酰胺的10 mM EDTA中，65℃ 5 min或90℃ 2 min。脫落率95%。
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