產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號(hào)：M7426S, M7426M
產(chǎn)品規(guī)格：20 rxns, 100 rxns
儲(chǔ)存條件：2~8℃保存，有效期見外包裝
應(yīng)用范圍：糞便樣本中核酸的提取、富集、純化等
產(chǎn)品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7426S |
M7426M |
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A.裂解液 |
12 mL |
60 mL |
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B.結(jié)合液 |
6 mL |
30 mL |
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C.磁珠懸液 |
0.4 mL |
2 mL |
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D.洗滌液A |
15.2 mL（首次使用前請(qǐng)加入0.8 mL的異丙醇） |
76 mL（首次使用前請(qǐng)加入4mL的異丙醇） |
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E.洗滌液B |
8 mL（首次使用前請(qǐng)加入8 mL的異丙醇） |
40 mL（首次使用前請(qǐng)加入40 mL的異丙醇） |
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F.洗滌液C |
8 mL（首次使用前請(qǐng)加入32 mL的無水乙醇） |
40 mL（首次使用前請(qǐng)加入160 mL的無水乙醇） |
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G.洗脫液 |
5 mL |
25 mL |
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H.蛋白酶K |
4 mg |
20 mg |
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I.溶液A |
0.4 mL |
2 mL |
注：需用戶自備異丙醇（分析純）、無水乙醇（分析純）。
產(chǎn)品介紹
糞便樣本中的人脫落細(xì)胞以及腸道菌群經(jīng)裂解后核酸釋放，利用磁珠與核酸特異性高效結(jié)合，并利用磁性分離器或磁棒使磁珠吸附于管壁或磁棒套，通過洗滌、洗脫過程得到所需的核酸。不同來源的固體和液態(tài)糞便樣本使用前請(qǐng)充分混合，防止樣本不均一。
適配儀器
本試劑盒適用于磁珠法吸附原理的自動(dòng)化核酸提取儀，也可進(jìn)行手工提取。
實(shí)驗(yàn)步驟
一．手動(dòng)操作流程
首次使用前：
1. 在洗滌液A中加入指定量（見瓶身標(biāo)簽）的異丙醇，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后于室溫下密閉保存。
2. 在洗滌液B中加入指定量（見瓶身標(biāo)簽）的異丙醇，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后于室溫下密閉保存。
3. 在洗滌液C中加入指定量（見瓶身標(biāo)簽）的無水乙醇，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后于室溫下密閉保存。
4. 在蛋白酶K干粉中加入指定量（見管身標(biāo)簽）的溶液A，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后于2~8℃保存，或分裝后于-20℃保存。
二．客戶自備物品
1.1.5 mL離心管：2個(gè)/樣品
2.2 mL離心管：1個(gè)/樣品
3.單通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL
4.漩渦振蕩器
5.離心機(jī)
6.恒溫金屬?。ɑ蛩″仯?0℃/55℃
7.磁性分離器
三．操作步驟（以200 mg糞便樣本為例，1 g樣本加樣要求參見表1）：
1. 樣本采集：移取180 mg-220 mg糞便樣本到2mL離心管中。
2. 裂解
（1）在上述2 mL離心管中加入600μL的裂解液（使用前65℃水浴5-10 min至溶液澄清），再加入20μL的蛋白酶K（檢查是否已加入溶液A），調(diào)整合適的轉(zhuǎn)速漩渦振蕩1 min，使其充分混合，再將離心管置于70℃加熱20 min，90℃加熱10 min，期間震蕩混勻三次。
（2）13000 rpm離心3 min，取300 μL上清至一個(gè)新的1.5 mL EP管中。若為1 g糞便樣本體系，取上清1.5 mL至新的15 mL EP管中。
3. 結(jié)合：在上述1.5 mL離心管中加入300 μL結(jié)合液，200 μL異丙醇，20 μL磁珠懸液，震蕩混勻30 s，室溫結(jié)合5 min，期間顛倒混勻兩次，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
注：此步驟磁性分離時(shí)間應(yīng)不少于2 min。
4. 洗滌
（1）加入800μL洗滌液A，震蕩混勻30 s，室溫下靜置1 min，期間上下顛倒混勻一次，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
（2）加入800μL洗滌液B（檢查是否已加入異丙醇），震蕩混勻30 s，室溫下靜置1 min，期間上下顛倒混勻一次，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
（3）加入800μL洗滌液C（檢查是否已加入無水乙醇），震蕩混勻30 s，室溫下靜置1 min，期間上下顛倒混勻一次，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
（4）重復(fù)步驟（3）一次（若為1 g糞便樣本體系，該步僅加入1 mL洗滌液C，震動(dòng)混勻后轉(zhuǎn)移至1.5 mL EP管中）。
注：步驟（4）應(yīng)盡量除盡洗滌液。
5. 干燥：保持離心管于磁力架上，將其置于超凈工作臺(tái)中風(fēng)干至磁珠表面無明顯光澤（5-7 min）。
6. 洗脫：加入50μL 65℃預(yù)熱的洗脫液，震蕩混勻30 s，于65℃加熱5 min后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化得到的基因組DNA，可保存于-20℃。
表1.不同樣本量對(duì)應(yīng)使用的反應(yīng)管規(guī)格和試劑加入量
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樣本體積 反應(yīng)管/試劑 |
200 mg |
1g |
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反應(yīng)管規(guī)格 |
2mL |
15 mL |
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蛋白酶 K |
20 μL |
100 μL |
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糞便樣本 |
200 mg |
1 g |
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裂解液 |
600 μL |
3 mL |
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結(jié)合液 |
300 μL |
1.5 mL |
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異丙醇 |
200μL |
1mL |
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磁珠懸液 |
20 μL |
40 μL |
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洗滌液A |
800 μL |
4mL |
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洗滌液B |
800 μL |
4mL |
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洗滌液C |
800 μL |
4 mL |
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洗脫液 |
50 μL |
100 μL |
二、自動(dòng)化操作流程
可以適配市面上大部分品牌核酸提取儀，詳細(xì)參數(shù)請(qǐng)聯(lián)系我司技術(shù)支持或設(shè)備廠商技術(shù)支持。
注意事項(xiàng)
1. 操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品手冊(cè)。
2. 提取效果與糞便樣本質(zhì)量有關(guān)。
3. 蛋白酶K干粉溶解后，可分裝儲(chǔ)存于-20℃，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4. 應(yīng)避免對(duì)磁珠進(jìn)行冷凍、離心等操作。
5. 磁珠取用前應(yīng)充分重懸均勻。
6. 磁珠干燥前，應(yīng)用移液器吸盡洗滌液；應(yīng)避免磁珠過度干燥，否則會(huì)嚴(yán)重降低核酸洗脫效率。
7. 建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液器吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。
8. 本產(chǎn)品使用后請(qǐng)按醫(yī)療垃圾進(jìn)行處理。
9. 使用前請(qǐng)檢查各組分是否存在析出情況，如有析出，請(qǐng)將試劑瓶置于60℃水浴加熱溶解后使用。
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