（4）單通道移液器：200 μL、1000 μL

（5）漩渦振蕩器

（6）垂直混合儀

（7）恒溫金屬浴或水浴鍋

（8）磁性分離器

2.操作步驟（以400 μL樣本量為例）

（1）唾液樣本裂解

a.向1.5 mL離心管中加入400 μL唾液樣本（若樣本體積不足400 μL，請(qǐng)加入唾液保存液補(bǔ)齊至400 μL）、20μL蛋白酶K溶液、以及200 μL裂解液，渦旋混勻。

注意：裂解液低溫情況下可能出現(xiàn)沉淀，可于37℃加熱2 min融化。

b.將離心管與55℃溫浴10 min，期間每隔5 min搖晃混均一次，完畢后低速瞬離使管蓋以及管壁上液體集中到官底，待用。

（2）結(jié)合：向上述離心管中加入350 μL異丙醇，再加入50 μL磁珠懸液，渦旋震蕩3 min混勻后靜置2 min。

（3）磁性分離：將離心管置于磁力架上靜置20 s至磁珠吸附完全；如果離心管內(nèi)蓋有磁珠，可保持EP管在磁力架上，整體上下顛倒2-3次至磁珠完全吸附。保持EP管固定于磁力架上，用移液槍吸棄上清液，期間避免接觸磁珠。

（4）洗滌1：向1.5mL離心管中加入800 μL洗滌液I，將1.5mL離心管從磁力架上取下，用移液槍吹散磁珠，渦旋震蕩2 min，磁性分離（參照步驟3）操作），再重復(fù)此操作1次。

（5）洗滌2：使用800 μL洗滌液II，（參照步驟（4）操作）。

（6）干燥：保持離心管于磁性分離器上，于是室溫下開蓋靜置10 min后，取下離心管。

注意：干燥過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)反應(yīng)管中有液體殘留時(shí)，可用小量程移液器吸棄液體。

7）洗脫：加入100 μL洗脫液 ，渦旋震蕩1 min或用移液器緩慢 吹打磁珠50次，使磁珠充分懸浮，于65℃加熱10 min后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化得到的唾液DNA，可保存于-20℃。

二、自動(dòng)化操作流程

可以適配市面上大部分品牌核酸提取儀，詳細(xì)參數(shù)請(qǐng)聯(lián)系我司技術(shù)支持或設(shè)備廠商技術(shù)支持。

注意事項(xiàng)

1.操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品手冊(cè)。

2.唾液樣品的質(zhì)量對(duì)產(chǎn)物DNA的純化量有較大影響，應(yīng)避免反復(fù)凍融唾液樣品。

3.蛋白酶K干粉溶解后，可分裝儲(chǔ)存于-20℃，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4.應(yīng)避免對(duì)磁珠進(jìn)行冷凍、離心等操作。

5.磁珠取用前應(yīng)充分重懸均勻。

6.磁珠干燥前，應(yīng)使用移液器吸盡洗滌液。

7.應(yīng)避免磁珠過(guò)度干燥，否則會(huì)嚴(yán)重降低核酸洗脫效率。

8.建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液器吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。

9.在96孔板中進(jìn)行磁性分離操作時(shí)，磁珠吸附時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。

10.使用前請(qǐng)檢查各組分是否存在析出情況，如有析出，請(qǐng)將試劑瓶置于60℃水浴加熱溶解后使用。