產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號(hào)：M7424S, M7424M
產(chǎn)品規(guī)格：10 rxns, 100 rxns
儲(chǔ)存條件：2~35℃保存，有效期見外包裝
產(chǎn)品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7424S |
M7424M |
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A.磁珠懸液 |
0.2 mL |
2 mL |
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B.緩沖液 |
3 mL |
30 mL |
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C.裂解液 |
2.5 mL |
25 mL |
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D.洗滌液I |
6 mL |
60 mL |
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E.洗脫液 |
2 mL |
20 mL |
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F.蛋白酶K |
0.2 mL |
2 mL |
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G.溶菌酶 |
36 mg |
360 mg |
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品適用于從細(xì)菌培養(yǎng)液等樣本中提取基因組DNA。提取利用超順磁性微球搭配特定的緩沖體系可以特異性結(jié)合細(xì)菌基因組DNA，通過洗滌去除DNA以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，分離純化得到高質(zhì)量核酸。提取的產(chǎn)物可用于各種分子實(shí)驗(yàn)，例如酶切、PCR等。
實(shí)驗(yàn)步驟
一．首次使用前
1.在洗滌液I中緩慢加入指定量（見瓶身標(biāo)簽）的異丙醇（分析純，需客戶自備），并打上“√”，混勻后2~8℃保存。
2.在溶菌酶干粉中加入指定量（見管身標(biāo)簽）的緩沖液，并打上“√”，混勻后分裝保存于-20℃，避免反復(fù)凍融，建議凍融不超過3次，以免影響其活性。
二．客戶自備物品
1.異丙醇（分析純）
2.80%乙醇
3.1.5 mL離心管：3個(gè)/樣品
4.單通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL
5.漩渦振蕩器
6.垂直混合儀
7.恒溫金屬浴或水浴鍋（75℃、56℃）
8.磁性分離器：可選用UE磁性分離器（貨號(hào)：M7429）
9.RNaseA（50mg/mL）：可根據(jù)需要選配
二．操作步驟
1. 樣本處理：取0.5~5 mL細(xì)菌培養(yǎng)液（<2×109細(xì)菌量），10000 rpm離心1~3min，棄上清。加入200μL緩沖液，振蕩至菌體徹底懸浮。
注意：對(duì)于較難破裂的革蘭氏陽性菌，可直接加入110 μL緩沖液和70 μL溶菌酶，37℃處理30 min以上。（檢查溶菌酶是否已加入緩沖液）
如果需要去除RNA，可加入10 μL RNaseA（50 mg/mL）溶液，振蕩混勻，室溫放置10 min。
2. 裂解：向管中加入20μL蛋白酶K和230μL裂解液，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩10 s后，置于75℃條件下反應(yīng)15 min，每5 min振蕩混勻一次。
3. 結(jié)合：加入300μL異丙醇和20μL磁珠懸液，漩渦震蕩10 s后，置于垂直混合儀上反應(yīng)3 min（或室溫靜置，每1分鐘振蕩混勻一次）。然后將離心管置于磁性分離器上放置2 min，用移液器移去上清液并取下離心管。
注意：此步驟的磁性分離時(shí)間應(yīng)不少于2 min。
4.洗滌
（1）加入600μL洗滌液I（檢查是否已加入異丙醇），以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少1 min，使磁珠充分重懸，再將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。
（2）重復(fù)該步驟一次。
（3）加入600μL 80%乙醇，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少1 min，使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。
（4）重復(fù)該步驟一次。
注意：最后一步洗滌應(yīng)盡量除盡洗滌液。
5. 干燥：保持離心管于磁性分離器上，于室溫下靜置5~10 min后，即磁珠表面無明顯光澤，取下離心管。
注意：干燥過程中若發(fā)現(xiàn)反應(yīng)管中有液體殘留時(shí)，可用小量程移液器吸棄液體。
6. 洗脫
（1）加入100~200μL洗脫液，渦旋震蕩，或用移液器緩慢吹打磁珠，使磁珠充分重懸。然后于56℃條件下孵育6 min。
（2）將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化得到的基因組DNA，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或保存于-20℃。
注意事項(xiàng)
1.操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品手冊(cè)。
2.樣品的質(zhì)量對(duì)產(chǎn)物DNA的純化量有較大影響，應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。
3.長期保存時(shí)，建議將蛋白酶K、溶菌酶保存在-20℃，磁珠懸液保存在2~8℃。
4.應(yīng)避免對(duì)磁珠進(jìn)行冷凍、離心等操作。
5.磁珠取用前應(yīng)充分重懸均勻。
6.磁珠干燥前，應(yīng)使用移液器吸盡洗滌液。
7.應(yīng)避免磁珠過度干燥，否則會(huì)嚴(yán)重降低核酸洗脫效率。
8.建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液器吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。
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