產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號：M7420S, M7420M
產(chǎn)品規(guī)格：10 rxns, 100 rxns
儲存條件：DNase I、10×Reaction Buffer保存于-20℃，其他試劑2~35℃保存，有效期見外包裝
應(yīng)用范圍：用于從抗凝處理的新鮮全血樣本中提取總RNA
產(chǎn)品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7420S |
M7420M |
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A.磁珠懸液 |
0.2 mL |
2 mL |
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B.裂解液 |
4mL |
40mL |
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C.洗滌液I |
6mL（首次使用前加入6 mL異丙醇） |
60mL（首次使用前加入60 mL異丙醇） |
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D.洗滌液II |
4mL（首次使用前請加入16 mL無水乙醇） |
40mL（首次使用前請加入160 mL無水乙醇） |
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E.洗脫液 |
2mL |
20mL |
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F.蛋白酶K |
4 mg（首次使用前請加入0.2 mL溶液A） |
40 mg（首次使用前請加入2 mL溶液A） |
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G.溶液A |
0.2mL |
2mL |
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H.脫氧核糖核酸酶I（DNase I） |
0.1mL |
1mL |
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I.反應(yīng)緩沖液（10× Reaction Buffer） |
0.1mL |
1mL |
產(chǎn)品介紹
用于從抗凝處理的新鮮全血樣本中提取總RNA。其處理后的產(chǎn)物用于臨床體外檢測使用。本產(chǎn)品使用超順磁性微球可以特異性的吸附核酸，通過DNase I處理去除DNA，通過洗滌去除蛋白質(zhì)、鹽類等雜質(zhì)，洗脫液解離吸附在磁珠上的RNA，分離純化得到高質(zhì)量RNA。
適用儀器
本試劑盒適用于Thermo KingFisher Flex24等大體積自動化核酸提取儀，也適用于手動提取。
實驗步驟
一．首次使用前
1.在洗滌液I中加入瓶身標(biāo)簽指定量的異丙醇（分析純），并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻。
2. 在洗滌液II中加入瓶身標(biāo)簽指定量的無水乙醇（分析純），并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻。
3. 在蛋白酶K中加入瓶身標(biāo)簽指定量的溶液A，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后保存于-20℃。
二．客戶自備物品
1.異丙醇（分析純）
2.1.5 mL離心管：RNase-free
3.單通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL
4.漩渦振蕩器
5.磁性分離器：可選用UE磁性分離器（貨號：M7429）。
注：每次使用前，試劑盒與樣本需平衡至室溫。
三．手動提取流程
1.準(zhǔn)備DNase I反應(yīng)液：取一個1.5 mL離心管，根據(jù)樣本數(shù)N，依次加入80×N μL的洗脫液 、10×N μL的10×Reaction Buffer、10×N μL的DNase I ，使用移液槍緩慢吸移20次或緩慢上下顛倒離心管20次混勻后待用。
注意：DNase I、DNase I反應(yīng)液不可渦旋！
2.裂解：取新的1.5mL離心管，分別加入200 μL全血樣本（不足200 μL時可用PBS或生理鹽水補(bǔ)足），再分別加入400 μL裂解液和20 μL蛋白酶K，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩2 min。
3.結(jié)合：在離心管內(nèi)分別加入200 μL異丙醇和20 μL磁珠懸液，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩2 min，室溫靜置15 min（間隔5 min渦旋震蕩30 s）。然后將離心管置于磁性分離器上放置1 min，用移液槍吸棄上清液并取下離心管。
4.洗滌
a. 在離心管內(nèi)分別加入600 μL洗滌液I（檢查是否已加入異丙醇），以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩2 min，使磁珠充分重懸（如發(fā)現(xiàn)磁珠粘壁，可使用移液槍吸取管內(nèi)的洗滌液Ⅰ反復(fù)吹打下管壁磁珠后再渦旋震蕩2 min），將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液槍吸棄上清液并取下離心管。
b.重復(fù)步驟a。
c.在離心管內(nèi)分別加入600 μL洗滌液II（檢查是否已加入無水乙醇），以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩2 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液槍吸棄上清液后室溫靜置3 min，取下離心管。
5. DNase I處理
a. 在離心管內(nèi)分別加入100 μL DNase I反應(yīng)液，使用移液槍吸取管內(nèi)的DNase I反應(yīng)液反復(fù)吹打下管壁磁珠，確認(rèn)管壁上所有磁珠都被吹打入反應(yīng)液后再緩慢吸移反應(yīng)液20次使磁珠重懸。
b.室溫靜置15~30min。
6. 洗滌
a.在離心管內(nèi)分別加入600 μL洗滌液II，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩3 min，室溫靜置5 min。將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液槍吸棄上清液并取下離心管。
b.在離心管內(nèi)分別加入600 μL洗滌液II，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩2 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液槍吸棄上清液。
7.干燥：保持離心管于磁性分離器上，室溫靜置5 min后，取下離心管。
注意：干燥過程中若發(fā)現(xiàn)反應(yīng)管中有液體殘留時，可用小量程移液器吸棄液體。
8.洗脫：在離心管內(nèi)分別加入50-100 μL洗脫液，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩2 min，室溫靜置5 min。將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管中，此即為純化得到的RNA，可保存于-70℃。
四．自動化提取流程
根據(jù)不同型號自動化核酸提取儀而定，詳情請咨詢我司技術(shù)支持或設(shè)備廠家技術(shù)支持。
注意事項
1.操作之前，請務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品手冊。
2.血液樣本的質(zhì)量對產(chǎn)物RNA的完整性有較大影響，應(yīng)使用新鮮抗凝處理的全血樣本，新鮮全血樣本可暫存于2~8℃，避免凍融，應(yīng)及時處理。
3.應(yīng)避免對磁珠進(jìn)行冷凍、高速離心等操作。磁珠每次取用前應(yīng)充分重懸均勻。
4.應(yīng)避免磁珠過度干燥，否則會嚴(yán)重降低核酸洗脫效率。
5.應(yīng)使用無RNase的離心管和槍頭。
6. 操作人員戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。
7. 本產(chǎn)品為一次性使用，使用后請按醫(yī)療垃圾進(jìn)行處理。
8.使用前請檢查各組分是否存在析出情況，如有析出，請將試劑瓶置于60℃水浴加熱溶解后使用。
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