產(chǎn)品概述:
產(chǎn)品貨號(hào):M7419S, M7419M
產(chǎn)品規(guī)格:10 rxns, 100 rxns
儲(chǔ)存條件:2~8℃保存,有效期見外包裝
應(yīng)用范圍:適用于新鮮或冷凍的抗凝處理的人全血、組織、脫落細(xì)胞、拭子、血漿、血清、唾液、FFPE樣本
產(chǎn)品組分
組分 |
組分含量 |
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M7419S |
M7419M |
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A.磁珠懸液 |
0.2 mL |
2 mL |
B.裂解液 |
2.5 mL |
25 mL |
C.洗滌液Ⅰ |
6 mL |
60 mL |
D.洗脫液 |
3 mL |
30 mL |
E.蛋白酶K |
2 mg |
20 mg |
F.溶液A |
0.1 mL |
1 mL |
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品使用超順磁性微球可以特異性的吸附核酸,通過(guò)洗滌去除核酸以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。洗脫液解離吸附在磁珠上的核酸,分離純化得到高質(zhì)量核酸。
適用儀器
本試劑盒適用于BIO-DL 32,TIANGEN TGuide S32, TIANLONG NP968-C, Rosetta 96等自動(dòng)化核酸提取儀,也適用于手動(dòng)提取。
實(shí)驗(yàn)步驟
一.首次使用前:
1. 在洗滌液I中緩慢加入指定量(見瓶身標(biāo)簽)的異丙醇(分析純,需客戶自備),并于“□”內(nèi)打上“√”,混勻后2~8℃保存。
2. 在蛋白酶K干粉中加入指定量(見管身標(biāo)簽)的溶液 A,并于“□”內(nèi)打上“√”,混勻后保存于 2~8℃,或分裝后保存于-20℃。
二.手動(dòng)操作流程
1.客戶自備物品
(1)異丙醇(分析純)
(2)80%乙醇
(3)1.5 mL離心管:2個(gè)/樣品
(4)單通道移液器:20 μL、200 μL、1000 μL
(5)漩渦振蕩器
(6)垂直混合儀
(7)恒溫金屬浴或水浴鍋(55℃)
(8)磁性分離器
2.操作步驟
(1)裂解:取一個(gè)新的1.5 mL離心管,加入200μL的抗凝血液樣品(不足200μL時(shí)可用PBS或洗脫液補(bǔ)足),再分別加入10μL的蛋白酶K(檢查是否已加入溶液A)和230μL的裂解液,以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩10 s后,置于55℃條件下反應(yīng)5 min。
(2)結(jié)合:加入320μL的異丙醇和20μL的磁珠懸液,以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩10 min(或漩渦震蕩10 s后置于垂直混合儀上反應(yīng)10 min)。然后將離心管置于磁性分離器上放置2 min,用移液器移去上清液并取下離心管。
注意:此步驟的磁性分離時(shí)間應(yīng)不少于2 min。
(3)洗滌
a.加入600μL洗滌液I(檢查是否已加入異丙醇),以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少1 min,使磁珠充分重懸,再將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清,移去上清液并取下離心管。重復(fù)該步驟一次。
b.加入600μL 80%乙醇,以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少1 min,使磁珠充分重懸,將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清,移去上清液并取下離心管。重復(fù)該步驟一次。
注意:最后一步洗滌應(yīng)盡量除盡洗滌液。
(4)干燥:保持離心管于磁性分離器上,于室溫下靜置10 min后,即磁珠表面無(wú)明顯光澤,取下離心管。
注意:干燥過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)反應(yīng)管中有液體殘留時(shí),可用小量程移液器吸棄液體。
(5)洗脫:加入100~200μL洗脫液,渦旋震蕩,或用移液器緩慢吹打磁珠,使磁珠充分重懸。然后于55℃條件下加熱5 min,將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清,轉(zhuǎn)移上清液至新的1.5mL離心管中,此即為純化得到的基因組DNA,可保存于-20℃。
三.自動(dòng)化操作流程
可以適配市面上大部分品牌核酸提取儀,詳細(xì)參數(shù)請(qǐng)聯(lián)系我司技術(shù)支持或設(shè)備廠商技術(shù)支持。
注意事項(xiàng)
1.操作之前,請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品手冊(cè)。
2.血液樣品的質(zhì)量對(duì)產(chǎn)物DNA的純化量有較大影響,應(yīng)避免反復(fù)凍融血液樣品。
3.蛋白酶K干粉溶解后,可分裝儲(chǔ)存于-20℃,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4.應(yīng)避免對(duì)磁珠進(jìn)行冷凍、離心等操作。
5.磁珠取用前應(yīng)充分重懸均勻。
6.磁珠干燥前,應(yīng)使用移液器吸盡洗滌液。
7.應(yīng)避免磁珠過(guò)度干燥,否則會(huì)嚴(yán)重降低核酸洗脫效率。
8.建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液器吸頭,避免因粘附磁珠而造成損失。
9.在96孔板中進(jìn)行磁性分離操作時(shí),磁珠吸附時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。
10. 使用前請(qǐng)檢查各組分是否存在析出情況,如有析出,請(qǐng)將試劑瓶置于60℃水浴加熱溶解后使用。