8.磁性分離器：可選用UE磁性分離器（貨號(hào)：M7429）

二．首次使用前

在洗滌液I（Washing Buffer I）中緩慢加入指定量（見瓶身標(biāo)簽）的異丙醇（分析純，需客戶自備），并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后室溫保存。

三．樣本預(yù)處理

取動(dòng)物組織5-20 mg（肝臟、脾、肺、腎臟＜10 mg），盡量處理成小塊，加入200 μL組織消化液（Buffer TD）和20 μL蛋白酶K（Proteinase K），振蕩混勻，60℃消化30 min或至樣品消化完全，期間振蕩混勻數(shù)次。

注：樣本消化完成后，如果有組織碎片，建議12,000 rpm離心1 min去除殘留雜質(zhì)。

四．手動(dòng)提取流程

1.取上述處理好的樣本200 μL轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中。加入230 μL裂解液（Buffer LB），振蕩混勻，56℃孵育5 min。

2.加入320 μL異丙醇，振蕩混勻，加入20 μL磁珠懸液（UElandy Beads），振蕩混勻后置于垂直混懸儀上孵育10 min，然后將離心管置于磁性分離器上放置2 min，用移液器移去上清液并取下離心管。

3.加入600 μL洗滌液I（Washing Buffer I）（檢查是否已加入異丙醇），振蕩混勻1 min，使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。

注：如果需要去除RNA，可重復(fù)步驟3并加入2 μL RNase A，渦旋混勻，室溫放置10 min。

4.加入600 μL 80%乙醇，振蕩混勻1 min，使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。

5.保持離心管于磁性分離器上，室溫靜置約10 min，即磁珠表面無明顯光澤，取下離心管。

注：干燥過程中若發(fā)現(xiàn)反應(yīng)管中有液體殘留時(shí)，可用小量程移液器吸棄液體。

6.加入50~100 μL洗脫液（Buffer EB），振蕩混勻，56℃孵育5 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管中，并于適當(dāng)條件保存。

五．自動(dòng)化操作流程

可以適配市面上大部分品牌核酸提取儀，詳細(xì)參數(shù)請(qǐng)聯(lián)系我司技術(shù)支持或設(shè)備廠商技術(shù)支持。

注意事項(xiàng)

1.操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品手冊(cè)。

2.提取效果與樣本質(zhì)量有關(guān)，應(yīng)避免對(duì)樣本進(jìn)行反復(fù)凍融。

3.應(yīng)避免對(duì)磁珠進(jìn)行冷凍、離心等操作。

4.磁珠取用前應(yīng)充分重懸均勻。

5.磁珠干燥前，應(yīng)用移液器吸盡洗滌液。

6.應(yīng)避免磁珠過度干燥，否則會(huì)嚴(yán)重降低核酸洗脫效率。

7.建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液槍吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。

8.若試劑出現(xiàn)沉淀，可于55℃孵育5min。

9.預(yù)裝板使用前需低速離心，確保溶液聚集在孔底。

10.提取結(jié)束后吸取洗脫液時(shí)如發(fā)現(xiàn)板內(nèi)壁上有殘留洗脫液，也需一起吸取。