產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號：M7417S, M7417M
產(chǎn)品規(guī)格：20 rxns, 100 rxns
儲存條件：2~8℃保存，可在常溫下短時間儲存，有效期見外包裝
應(yīng)用范圍：用于核酸的提取、富集、純化等步驟
產(chǎn)品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7417S |
M7417M |
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A.磁珠懸液 |
4 mL |
20 mL |
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B.裂解液 |
20 mL |
100 mL |
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C.洗滌液I |
60 mL |
150 mL×2 |
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D.洗滌液II |
12 mL（首次使用前每瓶內(nèi)加入48 mL乙醇） |
30 mL×2（首次使用前每瓶內(nèi)加入120 mL乙醇） |
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E.洗脫液 |
3 mL |
15 mL |
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F.蛋白酶K |
10 mg（首次使用前加入1 mL溶液A） |
50 mg（首次使用前加入5 mL溶液A） |
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G.溶液A |
1 mL |
5 mL |
產(chǎn)品介紹
含有靶核酸的待分離樣品經(jīng)裂解后，利用磁珠與DNA分子特異性識別和高效結(jié)合，并利用磁性分離器或磁棒使磁珠吸附于管壁或磁棒套，通過洗滌、洗脫、純化過程得到所需的DNA。
適用儀器
本試劑盒適用于Thermo KingFisher Flex24等大體積自動化核酸提取儀，也適用于手動提取。
樣本要求
新鮮或冷凍的血漿、血清、尿液或無細胞體液。樣本處理示例：
1.血漿樣本：取含有抗凝劑或游離DNA保存液的采血管中的血液放入冷凍離心機內(nèi)設(shè)置4℃，3800 rpm（約2000 g）離心10 min。使用移液槍緩慢吸取上層上清即為血漿，吸取時槍頭盡量遠離中間的細胞層，防止吸入細胞。取出上清后對上清再次進行4℃，10000 rpm（約16000 g）離心10 min后取上清，以去除細胞碎片等雜質(zhì)。
如血漿經(jīng)冷凍再次融化，需進行4℃，10000 rpm（約16000 g）離心10 min取上清，以去除凍融產(chǎn)生的析出物。
2.血清樣本：離體的血液室溫30 min凝固之后，放入冷凍離心機內(nèi)設(shè)置4℃，3800 rpm（約2000 g）離心10 min。使用移液槍緩慢吸取上清即為血清。
3. 尿液樣本：取新鮮尿液樣本放入冷凍離心機內(nèi)設(shè)置4℃，3800 rpm（約2000 g）離心10 min。使用移液槍緩慢吸取上清，吸取時槍頭盡量遠離底部的細胞層。取出上清后對上清再次進行4℃，10000 rpm（約16000 g）離心10 min后取上清去除細胞碎片等雜質(zhì)。
實驗步驟
一．首次使用前：
1.在蛋白酶K干粉中加入指定量（見瓶身標(biāo)簽）的溶液A，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后需保存于-20℃。
2.在洗滌液II中加入指定量（見瓶身標(biāo)簽）的無水乙醇（需客戶自備），并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻。
二．手動操作流程
1.客戶自備物品
（1）1.5 mL離心管、15 mL離心管、50 mL離心管（僅適用于4 mL樣本體積）
（2）單通道移液器：200 μL、1000 μL 、5 mL
（3）渦旋震蕩器
（4）恒溫金屬浴或水浴鍋（60℃）
（5）2/15 mL磁性分離器、50 mL磁性分離器
（6）異丙醇
（7）無水乙醇
2. 操作步驟
注意：不同樣本體積及其它試劑加樣量請參照表1要求！
（1）裂解：取一個15 mL離心管（4 mL樣本體積可使用50 mL離心管，如用15 mL離心管導(dǎo)致無法渦旋混勻可用上下翻轉(zhuǎn)15 mL離心管20次替代渦旋混勻操作），加入表1對應(yīng)體積的蛋白酶K，再依次加入表1對應(yīng)體積的樣本和裂解液，最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩混合均勻30 s 后，將15 mL離心管置于恒溫金屬浴（或水浴鍋）60℃加熱20 min（每隔10 min渦旋震蕩30 s）。
（2）結(jié)合：向上述15 mL離心管中加入表1對應(yīng)體積的異丙醇和磁珠懸液，最大轉(zhuǎn)速渦旋震蕩混勻30 s 后，將15 mL離心管置于恒溫金屬?。ɑ蛩″仯?0℃加熱10 min（每隔5 min渦旋震蕩30 s），然后將15 mL離心管置于磁性分離器上至溶液澄清，用移液器吸棄上清液，取下15 mL離心管。
（3）洗滌：
注意：洗滌步驟b-d的磁吸過程中，溶液磁吸澄清后需同步上下翻轉(zhuǎn)磁性分離器和離心管使管蓋的磁珠吸附至管壁，減少磁珠損失。
a. 用移液器吸取1 mL洗滌液I反復(fù)吹打上述15 mL離心管中的磁珠20次，使磁珠充分重懸，用移液器吸取這1 mL磁珠懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中，將1.5 mL離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液后取下1.5 mL離心管。
b.在上述1.5 mL離心管中加入1 mL洗滌液Ⅰ，渦旋震蕩1 min使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液及管蓋液滴，取下離心管。
c.在上述1.5 mL離心管中加入1 mL洗滌液Ⅱ，渦旋震蕩1 min使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液及管蓋液滴，取下離心管。
d.在上述1.5 mL離心管中加入1 mL洗滌液Ⅱ，渦旋震蕩1 min使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液及管蓋液滴，保持離心管于磁性分離器上靜置1 min后用小量程的移液器吸棄管底及管壁的殘留液滴。
（4）干燥：保持離心管于磁性分離器上，于室溫下靜置5-10 min至磁珠表面無明顯的液體光澤，取下離心管。
（5）洗脫：在上述1.5 mL離心管中加入表1對應(yīng)體積的60℃預(yù)熱的洗脫液，渦旋震蕩1 min或用移液器吹打磁珠50次，使管壁的磁珠充分重懸，于恒溫金屬?。ɑ蛩″仯?0℃加熱3-5 min后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化后的游離DNA。
注意：本產(chǎn)品手動操作洗脫體積可低至20 μL，但需注意洗脫效率與洗脫液體積有關(guān)，洗脫液體積越大，洗脫效率越高，洗脫核酸總量越多。
表1.手動操作不同樣本體積及其它試劑加樣量
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樣本體積 加入試劑 |
600 μL |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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蛋白酶K |
30 μL |
50 μL |
100 μL |
150 μL |
200 μL |
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樣本 |
600 μL |
1mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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裂解液 |
600 μL |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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異丙醇 |
600 μL |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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磁珠懸液 |
120 μL |
200 μL |
400 μL |
600 μL |
800 μL |
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洗脫液 |
20~50 μL |
20~50 μL |
50~100 μL |
50~150 μL |
50~150 μL |
三．自動化操作流程
可以適配市面上大部分品牌核酸提取儀，詳細參數(shù)請聯(lián)系我司技術(shù)支持或設(shè)備廠商技術(shù)支持。
注意事項
1. 操作之前，請務(wù)必認真閱讀本產(chǎn)品手冊。
2. 提取效果與樣本質(zhì)量有關(guān)，應(yīng)避免對樣本進行反復(fù)凍融。如凍融后樣本中有析出物，應(yīng)高速離心去除析出物。
3. 應(yīng)避免對磁珠進行冷凍或過度干燥，否則會嚴重降低提取效率。
4. 磁珠每次取用前應(yīng)充分重懸均勻。
5. 使用前請檢查各組分是否存在析出情況，如有析出，請將試劑瓶置于60℃水浴加熱溶解后使用。本說明書提供3種樣本處理方法。
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