產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號(hào)：M7412S, M7412M, M7412L
產(chǎn)品規(guī)格：1 mL, 10% (v/v), 30-150 μm;5 mL,10% (v/v), 30-150μm; 100 mL, 10%(v/v), 30-150 μm
儲(chǔ)存條件：2~8℃保存，有效期見(jiàn)外包裝
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品是由NHS活化的超順磁性微球與Protein A共價(jià)結(jié)合形成的復(fù)合微粒。與當(dāng)前國(guó)際免疫磁珠市場(chǎng)上同類(lèi)產(chǎn)品相比，該產(chǎn)品具有更高的抗體結(jié)合能力和較低的蛋白非特異吸附率，洗脫條件更均一，一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。本產(chǎn)品為微米級(jí)磁性微球，熟練操作可在15 min內(nèi)完成抗體吸附過(guò)程，30 min內(nèi)完成抗體純化流程。本產(chǎn)品可重復(fù)使用，適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關(guān)研究。表1為磁珠基本信息。本品與不同抗體的親和性比較參見(jiàn)附表1。
表1. Protein A瓊脂糖磁珠基本信息
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
Protein A抗體純化磁珠 |
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磁珠粒徑 |
30~150 μm |
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磁珠濃度 |
10%（V/V） |
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配基 |
Protein A |
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介質(zhì) |
Magrose |
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抗體結(jié)合能力（mg Human IgG/mL Gel） |
25~30 |
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結(jié)合洗滌液 |
PBST(pH( 7.2~7.4): 137 mM NaCl,2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20) |
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洗脫液 |
100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 |
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中和液 |
1.0 M Tris-HCl, pH 9.0 |
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保存液 |
PBST, 0.1% (V/V) Proclin 300 |
實(shí)驗(yàn)步驟
1.樣品處理：取人血清100 μL至1.5 mL EP管中，接著加入900 μL結(jié)合洗滌液，充分混勻。
2.磁珠預(yù)處理：將抗體純化磁珠漩渦振蕩30 s，使磁珠充分重懸；取200 μL 10%（V/V）磁珠懸液置于另一新的1.5 mL EP管中。對(duì)磁珠懸液進(jìn)行磁性分離，棄上清液，用1 mL結(jié)合洗滌液洗滌2次，磁性分離，管中磁珠可直接用于抗體分離。
注：該步驟磁珠的用量可根據(jù)磁珠對(duì)目標(biāo)抗體的最大結(jié)合量進(jìn)行調(diào)節(jié)，當(dāng)目標(biāo)抗體的濃度大于150 μg/mL時(shí)，用戶可取1.2~1.5倍磁珠用量（計(jì)算方式：如1.5×樣品中目標(biāo)抗體含量/磁珠最大結(jié)合量），若目標(biāo)抗體濃度過(guò)低，如低于70 μg/mL時(shí)，客戶為了提高抗體回收率，可增加磁珠用量，如提高至3倍磁珠用量。
3. 抗體吸附：在步驟2預(yù)處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下（約25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉(zhuǎn)約15 min后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液。
4. 磁珠洗滌：向EP管中加入1 mL結(jié)合洗滌液，振蕩重懸磁珠后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液；該操作重復(fù)3次。
5. 抗體洗脫：在上述完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5~1.0 mL洗脫液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下（約25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，翻轉(zhuǎn)10 min后進(jìn)行磁性分離，收集上清液至新的EP管。
注意事項(xiàng)：該步驟洗脫液用量，建議客戶使最終洗脫的抗體濃度控制在0.6~1.2 mg/mL，此時(shí)第1次洗脫條件中95%以上的抗體將被洗脫下來(lái)；若洗脫液 用量過(guò)少，會(huì)導(dǎo)致部分抗體在第1次洗脫時(shí)仍然留在磁珠上，從而導(dǎo)致抗體回收率降低。
6. 抗體中和：在步驟5抗體洗脫液中加入一定量的中和液，一般為抗體洗脫體積的1/10，最終使洗脫的抗體pH值保持中性環(huán)境，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
7. 磁珠后處理：使用后的磁珠用洗脫液洗滌2次，磁性分離，棄上清液；接著用結(jié)合洗滌液洗滌3次，磁性分離，棄上清液，加入200 μL保存液重懸磁珠，置于2~8℃保存。
8. 磁珠再生
（1）磁珠多次使用后會(huì)有沉淀蛋白、強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續(xù)使用5次后進(jìn)行磁珠再生處理。
（2）按約每1 mL 10%（V/V）磁珠加入1 mL 1%（V/V）Triron X-100磁珠再生緩沖液，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)混合，10 min后進(jìn)行磁性分離，棄上清液。
（3）立即加入1 mL結(jié)合洗滌液 進(jìn)行重懸，然后磁性分離，棄上清液，重復(fù)該操作3次。
（4）加入1 mL保存液 重懸磁珠，置于2~8℃保存。
注意事項(xiàng)
1.進(jìn)行抗體純化操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本操作說(shuō)明書(shū)。
2.本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用。
3.磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。
4.磁珠應(yīng)保存在儲(chǔ)存溶液中，防止干燥。
5.請(qǐng)勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。
附表1. Protein A與不同來(lái)源及類(lèi)型的抗體親和性比較
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物種 |
類(lèi)型 |
Protein A結(jié)合 |
|
人 |
IgA |
可變 |
|
IgD |
- |
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|
IgG1 |
++++ |
|
|
IgG2 |
++++ |
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|
IgG3 |
- |
|
|
IgG4 |
++++ |
|
|
IgM |
可變 |
|
|
小鼠 |
IgG1 |
+ |
|
IgG2a |
++++ |
|
|
IgG2b |
+++ |
|
|
IgG3 |
++ |
|
|
IgM |
可變 |
|
|
大鼠 |
IgG1 |
- |
|
大鼠 奶牛 |
IgG2a |
- |
|
IgG2b |
- |
|
|
IgG3 |
- |
|
|
IgG |
++ |
|
|
山羊 |
IgG |
- |
|
綿羊 |
IgG |
- |
|
馬 |
IgG |
++ |
|
兔 |
IgG |
++++ |
|
豬 |
IgG |
+++ |
|
豚鼠 |
IgG1 |
++++ |
|
豚鼠 倉(cāng)鼠 |
IgG2 |
++++ |
|
IgG |
+ |
|
|
獼猴 |
IgG |
++++ |
|
禽卵黃 |
IgY |
- |
|
狗 |
IgG |
++ |
|
考拉 |
IgG |
- |
|
羊駝 |
IgG |
- |
注: “+”=結(jié)合能力弱，“+++”=結(jié)合能力中等，“+++++”=結(jié)合能力強(qiáng)，“-”=無(wú)法結(jié)合
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