產(chǎn)品規(guī)格

50 μL

儲存條件

-20℃避光保存，有效期見外包裝

應(yīng)用范圍

實時定量 PCR、高分辨率溶解曲線

產(chǎn)品參數(shù)

λabs/λem = 500/530 nm (結(jié)合DNA)

λabs = 471 nm (未結(jié)合DNA)

產(chǎn)品介紹

AugeGreen是一種用于實時定量PCR（qPCR）的DNA結(jié)合染料。該染料的諸多優(yōu)點使它遠(yuǎn)勝于SYBR Green I。除了有相似的光譜特性，AugeGreen有三個主要特點使它區(qū)別于SYBR Green I。

首先，AugeGreen對PCR的抑制性遠(yuǎn)小于SYBR Green I。因此，使用AugeGreen進(jìn)行的 qPCR實驗可以使用快速 PCR 步驟。同時，AugeGreen在實驗中可以使用較高的濃度，從而獲得遠(yuǎn)強(qiáng)于SYBR Green I擴(kuò)增信號。較高濃度的AugeGreen也消除了“染料重分布”的缺陷，使 AugeGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線分析（HRM）。該分析正被越來越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對PCR的抑制性，從而要求其使用濃度必須很低，因此SYBR Green I無法解決由低濃度造成的染料重分布問題，既不能用于多重PCR也不能用于 HRM。同時，染料重分布問題也可能影響常規(guī)熔解曲線的可靠性，因為低熔點的DNA鏈可能由于這種原因而無法檢測到。

第二，AugeGreen的穩(wěn)定性極強(qiáng)。在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。與之相反，SYBR Green I不穩(wěn)定而且降解后對PCR抑制性更強(qiáng)。

第三，AugeGree降低了細(xì)胞膜透性，因而比SYBR Green I 更加安全。獨立實驗室的測試結(jié)果顯示，AugeGreen既沒有誘變性也沒有細(xì)胞毒性。相反，雖然SYBR Green I本身誘變性很弱，但它在細(xì)胞中可能抑制了正常DNA的修復(fù)機(jī)制，使其有誘變增強(qiáng)作用?？紤]到PCR的廣泛使用，其安全性應(yīng)該足夠重視。

注意事項

1. qPCR儀器：對于iCycler的用戶，不需要在PCR Mix里面額外添加FAM。由于AugeGreen有輕微的背景熒光，它可以作為充足且穩(wěn)定的校準(zhǔn)基線來使用。對于Roche Light Cycler的用戶，如果使用玻璃毛細(xì)管進(jìn)行反應(yīng)，那么需要在反應(yīng)體系中額外加入BSA（終濃度~0.5 mg/mL）；如果使用透明的塑料毛細(xì)管，則不需要添加BSA。

2. 熔解曲線分析儀器：Rotor-Gene 6000, ABI 7500 FAST, HR1?, 384-well LightScanner?, Roche LightCycler 480, Rotor-Gene 6000, ABI 7500 FAST和Roche LightCycler 480等儀器都可以用于qPCR和熔解曲線的分析。具體參照儀器生產(chǎn)商的使用說明進(jìn)行數(shù)據(jù)的采集和分析操作。

3. 擴(kuò)增片段長度：推薦的DNA擴(kuò)增長度為50-200 bp，如果需要擴(kuò)增更長的DNA片段，那么需要適當(dāng)延長PCR的反應(yīng)時間。