產品特性

得率高：多至20μg質粒DNA

適用范圍廣：高拷貝、低拷貝質粒均適用

速度快：無需乙醇，單管制備少于20min

安全：無酚、氯仿等有機試劑污染

兩種純化方法可供選擇:  離心法和負壓法

純度高：適用于多種后續(xù)實驗

產品應用

DNA測序

限制性酶切

細菌轉化

文庫構建

體外轉錄與翻譯

分子文庫構建

常規(guī)細胞轉染

UElandy 質粒小量制備試劑盒采用SDS-堿裂解細菌細胞以及硅膠膜特異結合質粒DNA的原理，快速制備多至20ug質粒DNA。經過純化的質粒適用于DNA測序、限制性酶切、細菌轉化、文庫構建、體外轉錄與翻譯、分子文庫構建及常規(guī)細胞轉染等。

質粒提取常見問題與解答

1. 1. 同樣體積的新鮮菌液，為什么有些提取的質粒濃度高，而有些質粒的濃度低？這些情況應該如何處理? 

質粒提取高低的一個重要決定性因素是質粒載體的拷貝數，即質粒在一個大腸桿菌中的數目。對于低拷貝數的質粒，需要適當增加菌液的收集量，詳情請參閱說明書。

2. 請問能否使用UElandy 質粒小量制備試劑盒提取BAC之類的大質粒？

不建議使用。

3. 使用UElandy 質粒小量制備試劑盒，加入Buffer S3后沉淀不明顯。請問是什么原因?

一種可能是菌體太少，所以沒有明顯沉淀，建議增加菌體使用量。另外一種可能是加入Buffer S3后沒有充分混勻，建議加入Buffer S1后完全重懸菌體，加入Buffer S2后輕輕混勻，使菌體完全裂解，加入Buffer S3后充分混勻。

4. 使用UElandy 質粒大量制備試劑盒時，在DNA結合/洗滌步驟中能否使用離心法？

可以，使用與離心機配套的離心管可以進行離心。

5. 使用UElandy質粒中量制備試劑盒時，在DNA結合/洗滌步驟中能否使用離心法?

不建議使用。UElandy質粒中量制備試劑盒中的質粒制備管不能與常規(guī)的15ml，50ml離心管配套，所以無法使用。您可以通過使用負壓裝置來解決這一問題。如果無法取得相配套的負壓裝置，可以嘗試手推過濾器的方式進行，但這樣的操作容易引起污染。

6. UElandy質粒小量制備試劑盒中的制備管能否與UElandy DNA凝膠回收試劑盒中的制備管替換使用？

不能。兩種制備管都是基于硅膠膜技術，但是各自的制備管只有與各自試劑盒中的試劑盒配套才能達到最佳效果。質粒小量試劑盒結合能力最大為20μg，最長的質粒片段為50kb。膠回收試劑盒最大結合能力為8μg，最長的DNA結合片段為10kb。

7. 我提取的質粒為什么會有基因組條帶？

菌體在裂解和中和過程中如果操作過于劇烈就容易引起基因組污染。加入Buffer S2后要輕柔混勻，加入Buffer S3后混合均勻。如果發(fā)現裂解物在操作過程中過于黏稠，需要適當降低菌體的用量。

8. 我提取的質粒在電泳圖片上看，有一條緊挨著主帶的小條帶請問這是什么原因？如何判定它是否是雜帶？

那條帶很有可能就是變性條帶。如果在加入Buffer S2后沒有及時混勻菌體，會導致菌體局部堿性過強，破壞質粒的結構，在加入Buffer S3后質粒無法完全復性，就產生了這樣的變性條帶。

檢測的方式是通過酶切檢測，如果這條帶在酶切后依然存在，則是變性條帶，如果酶切后消失，則可能是質粒的不同狀態(tài)。

9. 我提取的質粒有明顯的RNA污染，請問是什么原因？

可能有以下兩種可能：

1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4°C冰箱。如果室溫放置，RNase A活力會下降，導致RNA 污染。

2、菌體過量。如果使用的菌體量過多，也可能導致RNA污染。適當減少菌體的用量。

10. 質粒得率很低，請問是什么原因？

質粒低的可能因素很多，以下是幾種可能原因：

1、菌體過量，導致菌體不能完全裂解和中和，最終導致質粒得率低。

2、Buffer W2中未按瓶子上得標注體積加入乙醇。

3、菌體老化，影響提取的效果。建議對菌液進行劃板培養(yǎng)，篩選新鮮克隆。

11. 請問Eluent Buffer的配方是什么？對于DNA測序有沒有影響？

Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl，pH8.0。質粒在這樣的溶液中能夠穩(wěn)定保存，而且測序不受影響。