產(chǎn)品概述：

本試劑盒采用改進(jìn)的SDS 堿裂解法，結(jié)合DNA制備膜選擇性地吸附DNA的方法達(dá)到快速純化質(zhì)粒DNA的目的。適合于從120-300 ml 細(xì)菌培養(yǎng)物中提取多至500 μg高純的質(zhì)粒DNA，用于測(cè)序、體外轉(zhuǎn)錄與翻譯、限制性內(nèi)切酶消化、細(xì)菌轉(zhuǎn)化等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性

Cat.No.	UE-MX-P-5	UE-MX-P-10	UE-MX-P-25
Kit size	5 preps	10 preps	25 preps
Maxiprep column	5	10	25
RNase A	135 μl	270 μl	700 μl
Buffer S1	70 ml	115 ml	285 ml
Buffer S2	70 ml	115 ml	285 ml
Buffer S3K	70 ml	115 ml	285 ml
Buffer B	70 ml	115 ml	285 ml
Buffer W1	80 ml	160 ml	350 ml
Buffer W2 concentrate	36 ml	2×36 ml	150 ml
Eluent	13 ml	25 ml	60 ml
Protocol manual	1	1	1

RNase A ：50 mg/ml, 室溫貯存6個(gè)月；長期貯存于-20℃。

Buffer S1：細(xì)菌懸浮液，加入RNase A后，混合均勻，4℃貯存。

Buffer S2：細(xì)菌裂解液（含SDS/NaOH），室溫密閉貯存。

Buffer S3K：中和液，室溫密閉貯存。

Buffer B：DNA結(jié)合溶液，室溫密閉貯存。

Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。

Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均勻，室溫密閉貯存。

Eluent：2.5 mM Tris-HCI，pH 8.5，室溫密閉貯存。

說明書：

 UE-MX-P-10/UE-MX-P-25    

常見問題解答：

◆同樣體積的新鮮菌液，為什么有些提取的質(zhì)粒濃度高，而有些質(zhì)粒的濃度低？這些情況應(yīng)該如何處理？
質(zhì)粒提取高低的一個(gè)重要決定性因素是質(zhì)粒載體的拷貝數(shù)，即質(zhì)粒在一個(gè)大腸桿菌中的數(shù)目。對(duì)于低拷貝數(shù)的質(zhì)粒，需要適當(dāng)增加菌液的收集量，詳情請(qǐng)參閱說明書。
以下是幾種常見載體的拷貝數(shù)：


◆使用UE質(zhì)粒大量制備試劑盒時(shí)，在DNA結(jié)合/洗滌步驟中能否使用離心法？
可以，使用與離心機(jī)配套的離心管可以進(jìn)行離心。

◆我提取的質(zhì)粒為什么會(huì)有基因組條帶？
菌體在裂解和中和過程中如果操作過于劇烈就容易引起基因組污染。加入Buffer S2后要輕柔混勻，加入Buffer S3后混合均勻。如果發(fā)現(xiàn)裂解物在操作過程中過于黏稠，需要適當(dāng)降低菌體的用量。

◆我提取的質(zhì)粒在電泳圖片上看，有一條緊挨著主帶的小條帶請(qǐng)問這是什么原因？如何判定它是否是雜帶？
那條帶很有可能就是變性條帶。如果在加入Buffer S2后沒有及時(shí)混勻菌體，會(huì)導(dǎo)致菌體局部堿性過強(qiáng)，破壞質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)，在加入Buffer S3后質(zhì)粒無法完全復(fù)性，就產(chǎn)生了這樣的變性條帶。
檢測(cè)的方式是通過酶切檢測(cè)，如果這條帶在酶切后依然存在，則是變性條帶，如果酶切后消失，則可能是質(zhì)粒的不同狀態(tài)。

◆我提取的質(zhì)粒有明顯的RNA污染，請(qǐng)問是什么原因？
可能有以下兩種可能：
1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4℃冰箱。如果室溫放置，RNase A活力會(huì)下降，導(dǎo)致RNA污染。
2、菌體過量。如果使用的菌體量過多，也可能導(dǎo)致RNA污染。適當(dāng)減少菌體的用量。

◆質(zhì)粒得率很低，請(qǐng)問是什么原因？
質(zhì)粒低的可能因素很多，以下是幾種可能原因：
1、菌體過量，導(dǎo)致菌體不能完全裂解和中和，最終導(dǎo)致質(zhì)粒得率低。

2、Buffer W2中未按瓶子上得標(biāo)注體積加入乙醇。

3、菌體老化，影響提取的效果。建議對(duì)菌液進(jìn)行劃板培養(yǎng)，篩選新鮮克隆。

◆請(qǐng)問Eluent Buffer的配方是什么？對(duì)于DNA測(cè)序有沒有影響？
Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl,pH8.0。質(zhì)粒在這樣的溶液中能夠穩(wěn)定保存，而且測(cè)序不受影響。