產(chǎn)品概述：
儲存條件
RNase A: 50 mg/ml, 室溫可貯存6個(gè)月，長期貯存于-20℃。
Buffer S1: 細(xì)菌懸浮液。加入RNaseA后，混合均勻，4℃貯存。
Buffer S2: 細(xì)菌裂解液（含SDS/NaOH), 室溫密閉貯存。
Buffer S3K: 中和液，室溫密閉貯存。
Buffer B: DNA結(jié)合溶液，室溫密閉貯存。
BufferW1: 洗滌液，室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate: 去鹽液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（可用無水乙醇或95%乙醇）?；旌暇鶆?，室溫密閉貯存。
ET-free water (70% Ethanol): 使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇 （可用無水乙醇或95%乙醇）?；旌暇鶆颍覝孛荛]貯存。
Eluent A: 洗脫液。室溫密閉貯存。
Buffer ETR: 內(nèi)毒素去除液。室溫密閉貯存。
Buffer PF: 分相緩沖液。室溫密閉貯存。



流程圖

說明書：

 UE-MX-EP-10/UE-MX-EP-25    

常見問題解答：

◆同樣體積的新鮮菌液，為什么有些提取的質(zhì)粒濃度高，而有些質(zhì)粒的濃度低？這些情況應(yīng)該如何處理？
質(zhì)粒提取高低的一個(gè)重要決定性因素是質(zhì)粒載體的拷貝數(shù)，即質(zhì)粒在一個(gè)大腸桿菌中的數(shù)目。對于低拷貝數(shù)的質(zhì)粒，需要適當(dāng)增加菌液的收集量，詳情請參閱說明書。
以下是幾種常見載體的拷貝數(shù)：


◆我提取的質(zhì)粒為什么會(huì)有基因組條帶？
菌體在裂解和中和過程中如果操作過于劇烈就容易引起基因組污染。加入Buffer S2后要輕柔混勻，加入Buffer S3后混合均勻。如果發(fā)現(xiàn)裂解物在操作過程中過于黏稠，需要適當(dāng)降低菌體的用量。

◆我提取的質(zhì)粒在電泳圖片上看，有一條緊挨著主帶的小條帶請問這是什么原因？如何判定它是否是雜帶？
那條帶很有可能就是變性條帶。如果在加入Buffer S2后沒有及時(shí)混勻菌體，會(huì)導(dǎo)致菌體局部堿性過強(qiáng)，破壞質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)，在加入Buffer S3后質(zhì)粒無法完全復(fù)性，就產(chǎn)生了這樣的變性條帶。
檢測的方式是通過酶切檢測，如果這條帶在酶切后依然存在，則是變性條帶，如果酶切后消失，則可能是質(zhì)粒的不同狀態(tài)。

◆我提取的質(zhì)粒有明顯的RNA污染，請問是什么原因？
可能有以下兩種可能：
1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4℃冰箱。如果室溫放置，RNase A活力會(huì)下降，導(dǎo)致RNA污染。
2、菌體過量。如果使用的菌體量過多，也可能導(dǎo)致RNA污染。適當(dāng)減少菌體的用量。

◆質(zhì)粒得率很低，請問是什么原因？
質(zhì)粒低的可能因素很多，以下是幾種可能原因：
1、菌體過量，導(dǎo)致菌體不能完全裂解和中和，最終導(dǎo)致質(zhì)粒得率低。
2、Buffer W2中未按瓶子上得標(biāo)注體積加入乙醇。
3、菌體老化，影響提取的效果。建議對菌液進(jìn)行劃板培養(yǎng)，篩選新鮮克隆。

◆請問Eluent Buffer的配方是什么？對于DNA測序有沒有影響？
Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl,pH8.0。質(zhì)粒在這樣的溶液中能夠穩(wěn)定保存，而且測序不受影響。