產(chǎn)品概述：
儲存條件
Spin/vac mini column:小量制備管。室溫密閉貯存。
Buffer R-I:細(xì)胞裂解液。室溫密閉貯存。
Buffer R-II:中和液。室溫密閉貯存。
Buffer TE (nuclease-free):洗脫液。10 mM Tris-Cl,0.1 mM EDTA, pH 7.5。室溫密閉貯存。



流程圖

說明書：

 UE-MN-MiRNA-50/UE-MN-MiRNA-250    

常見問題解答：

◆miRNA提取得率低
·該組織或者細(xì)胞中miRNA含量偏低
不同細(xì)胞和組織中miRNA的豐度不同，對于miRNA含量低的樣本，可適當(dāng)提高起始樣本用量。
·組織起始量太少或者太多
樣品量過少，則細(xì)胞組織中miRNA含量較低；樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力，裂解將不完全，從而導(dǎo)致miRNA得率低。
·取樣為上清液時，盡量吸盡上清（如細(xì)胞培養(yǎng)上清）。
·洗脫液溫度過低
可以將洗脫液在65℃預(yù)熱后使用。
·miRNA富集失敗
檢查離心力是否達(dá)到要求；確定加入100%異丙醇沉淀miRNA

◆OD260/OD280比值偏低
·蛋白質(zhì)污染
在加入Buffer R-II中和離心后避免將沉淀物轉(zhuǎn)移到制備管上。
·用水稀釋樣品
miRNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進行吸光度值的測定，低離子強度或低pH值會使OD280值升高。
·多糖或多酚的殘留
一些特殊的組織和植物中，多糖、多酚含量較多，這些殘留也會導(dǎo)致OD260/OD280比值偏低。因此，從這類材料中提取miRNA時，需要注意多糖、多酚雜質(zhì)的去除。

◆RNA降解
·材料保存不當(dāng)
使用的組織材料不夠新鮮。提取miRNA的組織材料應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。絕不能未經(jīng)液氮速凍而直接保存于-80℃冰箱中。
·裂解液用量不足
如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養(yǎng)皿中裂解樣品，一定要使裂解液完全浸膜樣品。
·特殊材料
某些富含內(nèi)源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免miRNA的降解。更可靠的方法是：在液氮條件下將組織研碎，并且勻漿時使用更多裂解液。
·外源RNA酶的污染
試劑，器械及實驗環(huán)境中的RNA酶進入實驗系統(tǒng)。
·內(nèi)源RNA酶的污染
實驗樣品過多；勻漿時溫度過高。

◆基因組DNA污染
·樣品用量過多
樣品用量超出了裂解液R-I的處理范圍。請選擇合適的樣本處理量。
·樣品中含有有機溶劑（如乙醇、DMSO等）
避免這些會引起裂解液性質(zhì)改變的物質(zhì)。
·加入Buffer R-II離心后，取上清時避免吸入沉淀。

◆下游RT-PCR失敗
·乙醇?xì)埩?/strong>
步驟9進行乙醇干燥不充分，有乙醇?xì)埩?，從而抑制逆轉(zhuǎn)錄過程。