產(chǎn)品概述：
儲存條件
Buffer V-L: 病毒裂解液，室溫密閉貯存。
Buffer V-N: 蛋白去除液，室溫密閉貯存 。
BufferW1A: 洗滌液，使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇），混合均勻溫室密閉貯存。
Buffer W2 concentrate: 去鹽液，使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇），混合均勻，室溫密閉貯存。

Buffer TE (nuclease-free): 5mM Tris-HCI. 0.1 mM EDTA, pH8.5。無DNA/RNA酶活性，室溫密閉貯存。



流程圖

說明書：

 UE-MN-BF-VNA-10/UE-MN-BF-VNA-50/UE-MN-BF-VNA-250    

常見問題解答：

◆PCR或者RT-PCR擴(kuò)增多條帶/片段大小不對
考慮操作環(huán)境中的污染，如試劑、塑料耗材等。做一個陰性對照，確定擴(kuò)增出有正確條帶的多帶污染的來源（塑料/試劑）。

◆PCR擴(kuò)增不出
·引物、試劑或者是退火溫度等設(shè)置的問題
做質(zhì)控，確認(rèn)原因。
·忘記在Buffer W2中加乙醇。
確認(rèn)加入的是100%乙醇或者95%乙醇。如果對Buffer W2有疑問 ，可以用70%乙醇臨時代替檢驗結(jié)果。
·病毒滴度低
盡量提高病毒的使用量，重新PCR。增加PCR循環(huán)數(shù)。設(shè)置陽性質(zhì)控。
·病毒DNA降解
由于病毒在生物樣本中的含量往往很低，并且處理要很小心。在操作時盡量去除可能影響病毒得率的污染源。

◆RT-PCR擴(kuò)增不出條帶
·病毒滴度低
盡量提高RNA病毒的量，重新RT-PCR。提高RT-PCR循環(huán)數(shù)。設(shè)置陽性質(zhì)控。
·RNA病毒降解
由于病毒在生物樣本中的含量往往很低，并且處理要很小心。在操作時盡量去除可能影響病毒得率的污染源。比如使用經(jīng)過DEPC處理過的材料。加入RNasin（1unit/ul）到純化好的RNA病毒中也可以提高RNA的穩(wěn)定性。
·引物、試劑或者是退火溫度等設(shè)備問題

◆病毒DNA/RNA產(chǎn)量低或沒有DNA/RNA洗脫下來
·高水平的RNA酶活性導(dǎo)致RNA降解
嚴(yán)格按照RNA提取注意事項創(chuàng)造無DNA/RNA酶環(huán)境，得到的DNA/RNA產(chǎn)物應(yīng)該立刻使用或者保存在-80℃。
·蛋白酶K失效或者消化不完全
收到蛋白酶K后，充分溶解，按照每次使用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
·DNA/RNA仍在柱子上。
重復(fù)洗脫。
洗脫前將DEPC水預(yù)熱到70℃。
離心前將DEPC水加入柱子膜中央，使洗脫液完全浸潤制備膜，并靜置5min。
·柱子吸附量超載。
減少加入柱子中的樣品量。
增加蛋白酶K消化時間。
·Buffer W2中未加無水乙醇。
檢查試劑瓶標(biāo)簽并在Buffer W2中加入正確體積的無水乙醇。

◆DNA/RNA降解
·樣本有問題。
樣品應(yīng)該保存在液氮或者-80℃直到使用，不能反復(fù)凍融。
嚴(yán)格按照操作說明書快速提取RNA。
樣本本身病毒RNA含量低。
·DNA/RNA酶污染
嚴(yán)格按照RNA提取注意事項創(chuàng)造無RNA酶環(huán)境，確保在操作中未引入RNA酶。
檢查溶液是否有RNA酶污染。

◆低核酸產(chǎn)量或者純度不高
·試劑盒儲存在非最佳條件
收到試劑盒后總是存放在室溫（15℃-20℃）。
·緩沖液或者試劑暴露于減少它們有效性的條件下
儲存在室溫（15℃-20℃）每次用完后立刻蓋緊蓋子，以免溶液蒸發(fā)、PH改變和污染。
·緩沖液Buffer W2中忘記加無水乙醇
第一次實驗時，在緩沖液Buffer W2中加入指定量無水乙醇。
·試劑和樣品沒有充分混勻
加入每個試劑后都要充分混勻。
·蛋白酶K失效或者消化不完全
收到蛋白酶K后，充分溶解，按照每次使用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
·洗脫效率不高
確保緩沖液Buffer W2已清除干凈，否則殘留乙醇會影響洗脫效率 ，仔細(xì)閱讀洗脫操作步驟。

◆純化的DNA/RNA產(chǎn)物OD260數(shù)值異常偏高
·一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來，干擾了分光光度計讀數(shù)
建議：將洗脫的回收DNA/RNA溶液12,000×g再離心一分鐘，小心取上清使用。