產(chǎn)品概述:
儲(chǔ)存條件
Buffer DE-A: 凝膠熔化劑,含DNA保護(hù)劑,防止DNA在高溫下降解。室溫密閉貯存。
Buffer DE-B: 結(jié)合液(促使大于70bp的DNA片段選擇性結(jié)合到DNA制備膜上)。室溫密閉貯存。
BufferW1: 洗滌液,室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate: 去鹽液,使用前,按試劑瓶上指定的體積加入無(wú)水乙醇(用100%乙醇或95%乙醇),混合均勻,室溫密閉貯存。
Eluent: 洗脫液,室溫密閉貯存。

流程圖

常見(jiàn)問(wèn)題解答:
◆回收率低
·目的片段結(jié)合量低
通常這是因?yàn)闃悠分协傊沁^(guò)多或者質(zhì)量不好或者溶解不充分所導(dǎo)致。
對(duì)于小于400bp的片段回收時(shí)未加異丙醇會(huì)降低片段的結(jié)合量,因此要?jiǎng)?wù)必確保已加入了1倍體積量的異丙醇(100%)。
電泳緩沖液PH值過(guò)高,影響目的片段的結(jié)合。
·結(jié)合的DNA片段過(guò)早的被洗脫
buffer W2 中未加無(wú)水乙醇或者加入的乙醇不是95-100%的,都將會(huì)導(dǎo)致DNA片段在后續(xù)的洗滌過(guò)程中過(guò)早的被洗脫下來(lái)。因此要?jiǎng)?wù)必確保加入了正確的乙醇量。每次使用后應(yīng)擰緊瓶蓋,以免乙醇揮發(fā),降低回收率。
·洗脫效率低
最后一次buffer W2洗滌完后不要將制備管放于負(fù)壓裝置上抽的過(guò)干。為了提高洗脫效率可將洗脫液在65℃預(yù)熱。若用去離子水洗脫,請(qǐng)確保其PH值在7.0-8.5之間。
選用合適濃度的瓊脂糖凝膠電泳,上樣量不超過(guò)制備管的最大結(jié)合量(8ug)。切膠要迅速,防止紫外線對(duì)DNA的損傷。
◆酶切反應(yīng)不理想
·鹽分殘留
可以用2×Buffer W2進(jìn)行洗滌
·乙醇?xì)埩?/strong>
在最后一次Buffer W2洗滌后可將制備管由原來(lái)離心1min增加至離心2min。
·瓊脂糖殘留
為了確保完全去除瓊脂糖,應(yīng)確保瓊脂糖塊在Buffer DE-A中完全溶解。切膠時(shí)盡可能只保留含有DNA片段部分的凝膠以便于對(duì)瓊脂糖的處理。
·瓊脂糖凝膠電泳呈小彌散帶
可能洗脫產(chǎn)物中含有ssDNA,需將洗脫產(chǎn)物95度加熱2min,慢慢冷卻至室溫,使單鏈DNA重新退火即可。
◆膜脫落
·瓊脂糖有殘留,堵塞膜孔,導(dǎo)致膜在高速離心時(shí)受力過(guò)大,引起膜脫落或者膜下端突出,影響DNA回收
◆UE質(zhì)粒小量制備試劑盒中的制備管能否與UE DNA凝膠回收試劑盒中的制備管替換使用?
不能。兩種制備管都是基于硅膠膜技術(shù),但是各自的制備管只有與各自試劑盒中的試劑盒配套才能達(dá)到最佳效果。質(zhì)粒小量試劑盒結(jié)合能力最大為20μg,最長(zhǎng)的質(zhì)粒片段為50kb。膠回收試劑盒最大結(jié)合能力為8μg,最長(zhǎng)的DNA結(jié)合片段為10kb。