產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品規(guī)格
20T，100T，1000T
儲(chǔ)存條件
-20℃保存，有效期見外包裝
應(yīng)用范圍
真核基因表達(dá)調(diào)控研究
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 快速：細(xì)胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。
2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測(cè)步驟簡(jiǎn)單。
3. 靈敏：能夠檢測(cè)最低10-20 mol的螢光素酶。
4. 酶的濃度線性范圍可達(dá)8個(gè)數(shù)量級(jí)。
產(chǎn)品組分
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規(guī)格 組分 |
F6075S（20T） |
F6075M（100T） |
F6075L（10×100T） |
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A. 5× Passive Luciferase Lysis Buffer |
2 × 1 mL |
10 mL |
10 × 10 mL |
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B. Firefly Luciferase Assay Buffer |
2 mL |
10 mL |
10 × 10 mL |
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C. D-Luciferin |
0.4 mg |
2 mg |
10 × 2 mg |
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D. Renilla Luciferase Assay Buffer |
2 × 1 mL |
10 mL |
10 × 10 mL |
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E. 50× Coelenterazine |
40 μL |
200 μL |
10 × 200 μL |
產(chǎn)品介紹
真核基因表達(dá)調(diào)控研究常用的方法是進(jìn)行報(bào)告基因的檢測(cè)，生物發(fā)光法又是報(bào)告基因檢測(cè)最常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化，并發(fā)射出光子。該產(chǎn)品為螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測(cè)方法。能夠檢測(cè)最低10-20 mol的螢光素酶，在10-14至10-20 mol的酶濃度范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系。
注意事項(xiàng)
1. 使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 為取得最佳測(cè)定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí)，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制一致；使用具
有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí)，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑。
3. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發(fā)光的最強(qiáng)波長(zhǎng)為560 nm，海腎螢光素酶催化的生物發(fā)光的最強(qiáng)波長(zhǎng)為480 nm。
4. 為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。
5. 由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)，樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
6. 為了你的健康和安全，操作過(guò)程中務(wù)必穿戴實(shí)驗(yàn)服和一次性手套。
常見問(wèn)題解答：
◆雙螢光素酶報(bào)告基因最適反應(yīng)溫度？
室溫（20-22℃）。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫。此兩種螢光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響的，為了保證實(shí)驗(yàn)的一致性，我們推薦此兩種工作液在檢測(cè)時(shí)都孵育至室溫。
◆雙螢光素酶報(bào)告基因載體該如何選擇？
（1）螢火蟲報(bào)告基因質(zhì)粒原則上含有l(wèi)uc基因就可以，但是不同實(shí)驗(yàn)所需的載體有一定差異，如果您要自己構(gòu)建載體，要注意有些載體沒(méi)有啟動(dòng)子，需要自行插入啟動(dòng)子，如pGL3 Basic。
（2）海腎報(bào)告基因質(zhì)粒盡量選擇中等強(qiáng)度的啟動(dòng)子，如TK啟動(dòng)子等，不要選擇強(qiáng)啟動(dòng)子CMV、SV40等。海腎基因的表達(dá)活性應(yīng)顯著高于背景組，同時(shí)不干擾螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。。
◆檢測(cè)的螢光數(shù)值很低怎么辦？
（1）可能為轉(zhuǎn)染效率低
a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件，用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽(yáng)性對(duì)照（如轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)熒光蛋白質(zhì)粒）；
b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量，可通過(guò)酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對(duì)DNA質(zhì)量進(jìn)行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
（2）可能為啟動(dòng)子活性低或誘導(dǎo)失敗
a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動(dòng)子的條件；
b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達(dá)量；
c.更換強(qiáng)啟動(dòng)子（如SV40、CMV）。
注：海腎螢光素酶基因作為內(nèi)對(duì)照，其表達(dá)應(yīng)不受時(shí)期、部位、環(huán)境影響，因此常用組成型表達(dá)的TK啟動(dòng)子。
（3）樣品裂解效率低
a.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，12-36h內(nèi)最好，長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后，細(xì)胞可能會(huì)難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細(xì)胞能夠充分裂解。
（4）檢測(cè)過(guò)程操作不規(guī)范
a.選擇合適的檢測(cè)儀器，能夠檢測(cè)化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實(shí)驗(yàn)；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)很大偏差；
c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測(cè)，盡量在30min內(nèi)完成。
（5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：
Xiaofeng Zhou, Ziyi Yan1, Jinghan Hou, Lichen Zhang , Zhen Chen, Can Gao, Nor Hazwani Ahmad ,Mingzhou Guo, Weilong Wang, Tao Han , Tingmin Chang, Xiaohong Kang , Lidong Wang , Yinming Liang and Xiumin Li
應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)
Changsen Bai, Chaomin Wang, Jialei Hua, Na Zhao, Tong Li, Wenxin Li, Wenhao Niu, Benfu Zhong, Shuaini Yang, Chunda Chen, Gang Zhao, Li Qiu, Zhansheng Jiang, Lifang Li , Yueguo Li, Hailong Wang
Jiayang Li (李佳陽(yáng)) , Jiejie Ren (任潔潔) , Xingyu Lei (類興宇) , Wenmin Fan (樊文敏) , Lei Tang (唐磊) , Qiqi Zhang (張琦琦) , Zhulatai Bao (包珠拉太) , Wenfei Zhou (周文菲) , Juan Bai (白娟) , Yuzhou Zhang (張余周) , Chunmei Gong (龔春梅)
Yuxiang Liu, Jiangbo Qu, Rui Li, Jie Qi, Quanqi Zhang
5.Identiffcation of different myoffber types in pigs muscles and construction of regulatory networks
Chenchen Li, Yinuo Wang, Xiaohui Sun, Jinjin Yang, Yingchun Ren, Jinrui Jia, Gongshe Yang, Mingzhi Liao, Jianjun Jin, Xin'e Shi
6.Upregulation of coagulation factor V by glucocorticoid in the preovulatory follicles of zebrafish
Jing Huang a, Chao Sun a, Zhuo Huang a, Yong Zhu a b, Shi Xi Chen
Haigang Cao, Chenchen Li, Xiaohui Sun, Jinjin Yang, Xiao Li, Gongshe Yang, Jianjun Jin, Xine Shi
Changan Zhu, Zhangjian Hu, Chaoyi Hu, Hongxue Ma, Jie Zhou, Xiaojian Xia, Kai Shi, Christine H Foyer, Jingquan Yu, Yanhong Zhou
Jiayang Li, Jiejie Ren, Qiqi Zhang, Xingyu Lei, Zongqi Feng, Lei Tang, Juan Bai, Chunmei Gong
參考文獻(xiàn)
1.DDX3 Activates CBC-eIF3-Mediated Translation of uORF-Containing Oncogenic mRNAs to Promote Metastasis in HNSCC.應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)
2.Glucose starvation induces LKB1-AMPK-mediated MMP-9 expression in cancer cells.
應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)
3.Repression of MAP3K1 expression and JNK activity by canonical Wnt signaling.
應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)
4.The cellular stress proteins CHCHD10 and MNRR1 (CHCHD2): Partners in mitochondrial and nuclear function and dysfunction.
應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)
應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)
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