儲存條件

-20℃保存，有效期見外包裝

應(yīng)用范圍

真核基因表達(dá)調(diào)控研究

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 快速：細(xì)胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。

2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。

3. 靈敏：能夠檢測最低10^-20 mol的螢光素酶。

4. 酶的濃度線性范圍可達(dá)8個數(shù)量級。

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品介紹

真核基因表達(dá)調(diào)控研究常用的方法是進(jìn)行報告基因的檢測，生物發(fā)光法又是報告基因檢測最常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化，并發(fā)射出光子。該產(chǎn)品為螢火蟲螢光素酶報告基因在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測方法。能夠檢測最低10-20 mol的螢光素酶，在10-14至10-20 mol的酶濃度范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系。

注意事項

1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實驗。

2. 溫度會對酶的活性產(chǎn)生影響，因此所有試劑應(yīng)放置室溫后再使用。

3. 如果單管螢光測定儀測定，每個樣品與測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)保持一致。

4. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發(fā)光的最強(qiáng)波長為560 nm。

5. 為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

(1）可能為轉(zhuǎn)染效率低
a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實驗條件，用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽性對照（如轉(zhuǎn)染過表達(dá)熒光蛋白質(zhì)粒）；
b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質(zhì)量進(jìn)行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
(2）可能為啟動子活性低或誘導(dǎo)失敗
a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動子的條件；
b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達(dá)量；
c.更換強(qiáng)啟動子（如SV40、CMV）。
注：海腎螢光素酶基因作為內(nèi)對照，其表達(dá)應(yīng)不受時期、部位、環(huán)境影響，因此常用組成型表達(dá)的TK啟動子。
(3）樣品裂解效率低
a.細(xì)胞培養(yǎng)時間不宜過長，12-36h內(nèi)最好，長時間培養(yǎng)后，細(xì)胞可能會難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細(xì)胞能夠充分裂解。
(4）檢測過程操作不規(guī)范
a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實驗；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結(jié)果出現(xiàn)很大偏差；
c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時各個組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內(nèi)完成。
(5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲熒光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

◆進(jìn)行檢測的過程中，螢光信號值太高該如何進(jìn)行調(diào)整？
（1） 減少質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量。
（2）細(xì)胞樣品裂解后，離心取上清后檢測或?qū)α呀猱a(chǎn)物進(jìn)行稀釋后檢測。
注：不建議通過減少底物量來降低熒光值，需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實的表達(dá)水平，否則會造成檢測結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。